同位素标记相对和绝对定量iTRAQ技术
信息来源:本站原创   更新时间:2011/9/2 10:36:26

 

使用仪器:

 

Thermo LTQ Orbitrap Velos

 

   

 

高质量精确度通过降低假阳性结果从而为复杂样品中的蛋白质鉴定增加了速度和可信度。其超高分辨率能够提供完整蛋白质的分子量测定和等质量物种的深入分析,从而提供确定性的分析结果。对蛋白质组学研究人员来说,这些功能增加了序列覆盖范围和可信度,从而识别更多的蛋白质。

LTQ Orbitrap Velos新的HCD碰撞池更加高效,提高了同位素标记肽段的定量分析功能,诸如需要应用串联质谱标记(TMT)的分析。电子转移解离 (ETD)为高度敏感的翻译后修饰(PTM)分析和从头测序生成互补性信息

 

同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitationiTRAQ)技术是一种新的、功能强大的可同时对四种样品进行绝对和相对定量研究的方法。iTRAQ试剂为可与氨基酸N端及赖氨酸侧链连接的胺标记同重元素(isobaric)

 

技术原理:

 

    

 

iTRAQ4种同位素标记试剂由4种相对分子质量分别为114Da115 Da116 Da117 Da的报告基团(reporter group),相对分子质量分别为31 Da30 Da29 Da 28 Da 的平衡基团(balance group)以及相同的与肽段反应的基团(peptide reactive group)组成。其中每一种报告基团及与其相应的平衡基团的总分子质量均为145Da

 

     

 

4个来源不同的相同蛋白样品在一级质谱上表现相同。平衡基团在二级质谱发生中性丢失导致报告基团在二级质谱产生4个报告离子,分别是114 Da115 Da116 Da117 Da。通过分析报告离子的峰强度比值就可以分析同一个蛋白在不同样品间的表达量比值。

 

实验流程:

 

l         样本还原与巯基封闭;

 

l         胰蛋白酶解;

 

l         iTRAQ试剂标记;

 

l         混合标记蛋白;

 

l         LC-MS/MS质谱检测及数据分析